MRM/PRM定量蛋白质组学
技术原理
靶向蛋白质组PRM(平行反应监测, Parallel Reaction Monitoring),是一种基于高分辨、高精度质谱的靶向定量技术,能够对目标蛋白质/肽段(以及含有修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段的精准定量。靶向蛋白质组扫描就像精准狙击,排除干扰,目标明确。
四级杆(Q1)首先选出的目标肽段离子,进入碰撞室中打碎后,所有的碎片离子经过质量分析器产生一张高分辨的二级质谱图,通过提取其中的碎片离子信息即可实现目标肽段的定量。
PRM/MRM定量蛋白质组学技术原理图
技术特点
l 灵敏度高,提高检测目标离子的准确度;
l 通量高,一次性可以鉴定多达200多个蛋白
l 可以进行绝对定量分析,无需依赖抗体;
l 可直接检测二级所有离子,减少了子离子的挑选和优化过程。
样品要求
l 常规动物组织(脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤等):送样量>200mg;
l 常规植物组织(幼嫩的根、叶、花、愈伤组织等):送样量>1g;
l 悬浮/贴壁细胞:送样量>1x10
7个细胞或体积>50ul细胞沉淀;
l 血浆/血清样本:送样量>500ul;
l 微生物菌体:送样量湿重>100mg或体积>100ul。
注意事项
l 在蛋白质制备过程中使组织始终置于冰上,离心机、离心管等仪器设备要提前预冷,以防蛋白质的降解;
l 要加入适量的裂解液,裂解一定要充分、均匀;
l 植物和动物组织样本一般采用研磨或匀浆机破碎处理,细胞和菌体样本一般采用超声破碎,破碎过程中要避免材料的融化;
l 对预处理好的材料,若不立即进行实验,应冷冻保存(-80℃),对于易分解的生物大分子应选用新鲜材料制备;
l 对于样本量需求少的研究,如果组织样品本身非常细小,可直接裂解,以减少蛋白质的损失。
项目报告
l 实验步骤
l 液相/质谱参数
l 质谱谱图
l 蛋白质的鉴定定量信息
l 生物信息分析
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